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NOV1232_REDVET
Aceite de girasol ozonizado un nuevo producto eficaz en el tratamiento de la queratoconjuntivitis del conejo. (Ozonized sunflower oil a new effective product in the treatment of rabbit keratoconjunctivitis).

Resumen


El uso de la ozonoterapia en oftalmología es ampliamente conocida. Los efectos satisfactorios de esta terapia han sido demostrados tanto en humanos como en animales. Teniendo en cuenta el efecto germicida de amplio espectro del aceite de girasol ozonizado (AGO) en forma de colirio, su capacidad de favorecer la cicatrización y su efecto antiinflamatorio, el objetivo de este estudio es evaluar en un ensayo clínico la eficacia del tratamiento con AGO en la queratoconjuntivititis del conejo. Se utilizaron 40 conejos de la raza Chinchilla americano, Nueva Zelandia e Híbridos. Los conejos fueron divididos aleatoriamente en dos grupos experimentales de 20 animales cada uno. El diagnóstico de la queratoconjuntivitis fue realizada mediante examen clínico y microbiológico. El primer grupo fue tratado con AGO, mientras que al segundo se le aplicó el ungüento oftálmico QUERATOFURAL®, ambos tratamientos se aplicaron una vez al día durante 7 días. Al décimo día de iniciado el tratamiento se realizó el examen microbiológico para confirmar la efectividad de los tratamientos. Los resultados no mostraron diferencias significativas entre ambos productos en ensayo. Como conclusión, se confirmó la efectividad del tratamiento con AGO en forma de colirio, sin la presencia de efectos adversos y este puede ser utilizado en sustitución del fármaco de referencia (QUERATOFURAL®).

Abstract
The use of ozone therapy in ophthalmology is broadly well-known. The satisfactory effects of this therapy have been demonstrated so much in human as in animals. Taking into account, the wide spectrum germicidal effect of ozonized sunflower oil OSO as collyrium, its capacity to favor the scaring and its anti-inflammatory effect, the aim of this study was to evaluate the effectiveness of OLEOZON ® collyrium for the treatment of keratoconjunctivitis in rabbits. Forty rabbits from chinchilla American, New Zelandia and Hybrid race were used in the study. The rabbits were divided into two experimental groups of 20 animals each. The keratoconjunctivitis diagnostic was carried out by clinical and microbiological analysis. The first group was treated with OSO, while the second one was treated with QUERATOFURAL®, both products were applied once a day during 7 days. After the tenth day of initiate the treatment one carries out microbiological analysis to confirm the effectiveness of the treatments. The results did not show significant differences between both products tested. As conclusion, the effectiveness of the treatment with OSO as collyrium was confirmed, without side effects and it could be used in substitution of QUERATOFURAL® drug.


Introducción

En Cuba, la ozonoterapia en Oftalmología ha sido en principios estudiada para al tratamiento de la retinosis pigmentaria, 1 glaucoma, 2 de la degeneración macular asociada a la edad,3 de la queratoconjuntivitis y de la úlcera corneal.4 Recientemente se demostró la eficacia y seguridad del tratamiento con OLEOZON® colirio en gatos con queratitis herpética, clamidiosis, así como en úlceras corneales (herpéticas o traumáticas) y en úlceras corneales tratadas con trasplantes conjuntivales. 5


La queratoconjuntivitis es una entidad infecciosa y contagiosa que afecta a diferentes especies animales dentro de las que se encuentra el conejo. Esta enfermedad es causada tanto por bacterias como por virus y aunque no está descrita como una de las principales patologías involucradas en la morbilidad y mortalidad de las crías cunículas intensivas, si es considerada causante de pérdidas económicas por una disminución del consumo de alimentos y el consecuente retraso en el desarrollo. 6 Teniendo en cuenta que dentro de las fuentes secundarias de infección de las queratoconjuntivitis se encuentran las secreciones nasales y oculares, tanto de animales enfermos como portadores, podemos plantear que las infecciones respiratorias pueden tener como consecuencia, si estas no son bien tratadas, el desarrollo de queratoconjuntivitis. Las infecciones respiratorias son consideradas principales causas de morbilidad y mortalidad, junto con las enfermedades entéricas en las crías canículas intensivas. 7,8
El AGO se obtiene por la reacción del ozono con el aceite de girasol en condiciones apropiadas, obteniéndose aldehídos, ácidos carboxílicos, junto a hidroperóxidos, ozónidos y otras especies peroxídicas.9 Este producto se encuentra registrado en Cuba para el tratamiento de la tinea pedis, impétigo y giardiasis para uso humano con el nombre de (OLEOZON® tópico u oral). El efecto antimicrobiano contra virus, bacterias y hongos ha sido comprobado tanto in vitro como in vivo 10,11 incluyendo la efectividad del producto en el tratamiento de infecciones producidas por cepas multiresistentes.12 Adicionalmente, el AGO no solo tiene poder germicida, sino que también se le adjudican efectos antiinflamatorios y cicatrizantes. 13-15 Desde el punto de vista toxicológico, es un producto inocuo, y no posee efectos mutagénicos ni genotóxicos. 16-18
Teniendo en cuenta el gran poder germicida del AGO, su capacidad de favorecer la cicatrización y su efecto anti-inflamatorio, se realizó un ensayo clínico controlado y aleatorizado con el objetivo de evaluar la eficacia del AGO en forma de colirio en el tratamiento de la queratoconjuntivitis en conejos.
Materiales y Métodos
Animales:

Se utilizaron 40 conejos pertenecientes a las razas Chinchilla americano, Nueva Zelandia e Híbridos de diferentes categorías zootécnicas (lactantes, desarrollo y reproductores), con diagnóstico de queratoconjuntivitis, pertenecientes a las áreas de condiciones convencionales del CENPALAB (Centro Nacional para la Producción de Animales de Laboratorio). La alimentación de estos animales fue suministrada ad limitum (alimento concentrado producido en el CENPALAB fórmula 1400). Este estudio fue conducido bajo el cumplimiento de las normas éticas para los estudios en animales de laboratorio.

Los animales fueron distribuidos en dos grupos experimentales de 20 animales cada uno. Dentro de cada grupo, los animales fueron clasificados por grado de afectación (leve, severa y grave), según criterio de signos de inflamación presentes en la zona conjuntival y de la córnea, según Bofill y Rivas, 1988.19

Leve: secreción lagrimal, conjuntivitis y fotofobia.

Severa: secreción lagrimal purulento, conjuntivitis y fotofobia.

Grave: aparecen opacidades en la zona corneal o presencia de ulceras corneales.


Selección de los animales:

El diagnóstico de la queratoconjuntivitis se realizó primeramente mediante examen clínico de la zona ocular (ambos ojos), y se clasificó teniendo en cuenta el grado de lesión, dependiendo del tipo de secreción ocular, el proceso inflamatorio y el grado de compromiso del tejido corneal (descrito en el párrafo anterior), acompañado esto del análisis microbiológico del exudado ocular, con el objetivo de determinar el agente etiológico causante de la patología y al final de tratamiento como criterio de curación.

Los animales fueron distribuidos aleatoriamente en dos grupos experimentales uno que recibirá tratamiento con AGO en forma de colirio y el otro recibirá tratamiento con Queratofural ®
Tabla 1. Distribución aleatoria de los animales según germen aislado en el exudado ocular.


Grupo

E. coli

S. Aureus

total

AGO

8

12

20

Queratofural ®

6

14

20

total

14

26

40



Tratamientos:

El primer grupo se le aplicó AGO colirio (una gota) y al segundo grupo se le aplicó Queratofural® (ungüento oftálmico para uso veterinario), Labiofam S.A. Previa aplicación de ambos tratamientos se les realizó la limpieza de los ojos con una gasa embebida en solución salina estéril, para eliminar todo tipo de secreciones. Ambos tratamientos fueron aplicados durante 7 días, con una frecuencia de 24 h.


Tres días después de culminado el tratamiento con ambos productos en estudio, o sea, al décimo día de iniciado los tratamientos, se realizó el exudado ocular como diagnóstico final y criterio de curación.
También se tuvo en cuenta la aparición de reacciones adversas en la zona de aplicación de los productos, tales como edema, eritema y presencia de secreciones no inherentes a proceso patológico per se.
Análisis estadístico.
Los datos fueron procesados estadísticamente mediante el paquete NCSS. Se realizó una comparación de porcentajes de recuperados a través del un análisis de probabilidad exacta de Fisher. Para los datos de días en que se alcanzó la recuperación se aplicó un análisis de Mann-Whitney. El nivel de probabilidad utilizado para señalar la significación estadística fijado fue de p< 0,05
Resultados y discusión
La tabla 2 muestra que el agente etiológico más frecuente fue el S. aureus, afectando al 65 % de los animales, la E. coli fue diagnosticado en el 35 % del total de animales incorporados en el estudio.
En la tabla 3, se observan los porcentajes de recuperación para cada uno de los grupos de tratamientos, basados en el examen clínico de los ojos de los animales y el análisis microbiológico de las muestras de exudado, resultando que el 95 % de los animales para ambos grupos se recuperó en un termino total de aproximadamente 10 días. No se muestran diferencias significativas entre los grupos de animales estudiados, por lo que se demuestra una efectividad de los tratamientos de forma equivalente. Solamente en ambos grupos a un animal no se le dio el criterio de curación a pesar de tener un resultado negativo en el examen microbiológico, por presentar lesiones corneales que al termino de los 10 días no se habían recuperado en su totalidad.
El grafico 1 muestra la media de los días en que se alcanzó el criterio de curación de los animales, el cual estuvo relacionado con el grado de afectación y el tratamiento aplicado. Para todos los grados de afectación (leve, severo y grave), el AGO tuvo una tendencia a ser más eficiente, al alcanzar tiempos promedios de curación de 3, 5 y 7 días respectivamente, mientras que con el Queratofural ® se alcanzó la curación de las lesiones a los 4, 7 y 9 días, respectivamente. A pesar de existir diferencia entre los tiempos de recuperación de los animales entre un producto y el otro, no alcanzó niveles de significación estadística (p<0,05). Sin embargo, es importante destacar que desde el punto de vista económico, las diferencias en cuanto a los tiempos de recuperación de los animales, ya sea de uno o de dos días, tiene un significado económico importante dentro de los parámetros sobre el análisis de la rentabilidad economía de las crías canículas intensivas. Por otra parte, es de destacar que no se registraron reacciones adversas inherentes a los productos estudiados, dicho resultado se encuentra en concordancia con los reportados por Díaz 2006, 20 en cuanto a los estudios de irritabilidad oftálmica del AGO reportados. Los tiempos promedios de curación de los animales tratados con el AGO fueron alcanzados entre los 3 y 7 días, dependiendo del grado de la lesión ocular, estos resultados coinciden con los reportado por Vigna 2007, 5 quien obtuvo tiempos de curación entre 6 y 10 días igualmente dependiendo de la severidad de la queratoconjuntivitis y del germen causante de dicha patología. Es de destacar además la ausencia de efectos adversos en nuestro estudio.
La introducción del ozono en el campo de la medicina, condicionó la búsqueda de nuevas estrategias terapéuticas relacionadas con la ozonoterapia, tomando en consideración las propiedades químicas que poseen este gas y su interacción con las biomoléculas. De esta forma, los aceites de origen vegetal ozonizados se han convertido en un medio adecuado para el tratamiento local de algunas patologías. Desde el punto de vista terapéutico, el empleo del AGO en lugar del ozono gaseoso, para el tratamiento de enfermedades infecciosas, presenta la ventaja de tener mayor estabilidad, si se compara con el ozono y permite que el tratamiento pueda aplicarse de forma ambulatoria sin requerir la asistencia diaria del paciente.
Este producto se obtiene por la reacción del ozono con los dobles enlaces de las cadenas carbonadas de los ácidos grasos que componen el aceite de girasol, reacción que se realiza bajo condiciones controladas, obteniéndose aldehídos, ácidos carboxílicos, junto a hidroperóxidos, ozónidos y otras especies peroxídicas.21-24 Esta mezcla de compuestos peroxídicos como principios activos del AGO son los responsables fundamentales de los efectos farmacológicos demostrados, tal como su alto poder germicida, el cual se evidenció tanto in vitro como in vivo frente a bacterias, virus 25 y hongos 10,11. Se demostró que el mecanismo de acción fundamental del AGO como germicida, está basado en la reacción de oxidación de los grupos sulfhídrilos de la membrana celular, como daño primario, 26 lo que produjo la disminución de la viabilidad celular en más de un 90 % a partir del primer minuto de contacto y modificó la permeabilidad de la membrana plasmática al detectarse la pérdida del contenido de iones de K+, esto condujo a modificaciones ultraestructurales, así como la reducción progresiva del contenido citoplasmático de las células.27 26
Concomitantemente con el efecto germicida, se demostró en un estudio in vivo que el AGO (OLEOZON ®), tiene efecto antiinflamatorio 13, mientras que en un estudio in vitro se evidenció que los ozónidos presentes en el aceite de oliva después de su ozonización, son los principales responsables del efecto antiinflamatorio, mediado por la inhibición tanto de la cicloxigenasa 2 (COX 2) como de la prostaglandina E2 (PGE2 ). 14
El efecto cicatrizante de los aceites ozonizados ha sido demostrado in vivo mediante dos modelos experimentales, uno de herida punzante en ratones Balb/c 15 y el otro de herida cutánea en cobayos. 28 En el primer estudio se evaluó el AGO (OLEOZON ®) mientras que en el segundo, el aceite de oliva ozonizado (AOO), ambos estudios coinciden en el resultado de que los aceites ozonizados tienen efecto estimulador del proceso de fibroplasia, lo que quiere decir que el efecto cicatrizante del producto se encuentra vinculado con el tejido conectivo y sus componentes 15 y con el incremento de la síntesis de colágeno durante la formación del tejido de granulación, dicho proceso estuvo mediado por el acrecentamiento en la expresión de factores de crecimiento tales como el factor de crecimiento derivados de plaquetas (FCDP) y el factor de crecimiento transformador -β (FCT- β). 28
Estos resultados demuestran la eficacia y seguridad del AGO como tratamiento de la queratoconjuntivitis en conejos. Además, basándonos en nuestros resultados y otros anteriores, podemos plantear que el AGO en forma de colirio puede ser utilizado como tratamiento de elección en las queratoconjuntuvitis de cualquier especie animal, por su alto poder germicida y su demostrado efecto antiinflamatorio y cicatrizante.

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Tabla 1. Análisis microbiológico al inicio y al final de tratamiento.



Toma de muestra

n

E coli

S. Aureus

Inicio

40

14

26

Final

40

Neg

Neg



Neg: cultivo negativo. E coli: Escherichia coli. S aureus: Staphylococcus aureus

Tabla 2. Total de animales en el estudio y porcentajes de recuperación.




Grupos

n

Análisis microbiológico

Signos clínicos

Recup./no recup.



Recuperados (%)

AGO

20

neg

19/1 lesión corneal

19 (95)

Queratofural ®

20

neg

19/1 lesión corneal

19 (95)

Total

40







38

En ambos grupos, los tratados con AGO y Queratofural ® el porcentaje de recuperación estuvo determinado por los signos clínicos y el análisis microbiológico de las muestras de exudado ocular, se demostró que a pesar de la negativización en el análisis microbiológico para ambos grupos hubo un animal de cada grupo con lesiones graves que no pasaron a la categoría de recuperados. No hay diferencias significativas entre los grupos para p<0,05


Grafico 1. Media de los días en que los animales se recuperaron en dependencia del grado de afectación para cada uno de los grupos estudiados.






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